ScienCell胎牛血清

產(chǎn)品名稱：特級(jí)胎牛血清

貨號(hào)：0500

規(guī)格：500ml

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如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞？能用蛋白酶消化嗎？

我們推薦使用脫落細(xì)胞的方法，此技術(shù)破壞性最小，生活力最高。通過使用巴斯德吸液管，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動(dòng)。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在絕對(duì)必要的情況下，才使用胰消化細(xì)胞。

38.胰消化一個(gè)T25瓶的sf9細(xì)胞：

1. 去除培養(yǎng)基。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞，去除PBS。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）。

4. 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動(dòng)。

5. 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰的活性。）

6. 離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞。去除培養(yǎng)基。

7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，肝素的使用量是多少？

為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。

40.在重新凍存sf9細(xì)胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會(huì)降低嗎？

通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后，應(yīng)該返回凍存。無論什么時(shí)候計(jì)數(shù)時(shí)，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時(shí)左右加倍，細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時(shí)間下降，它們的感染力將不在是有效的。

41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，在放置幾天后顏色變紫?

這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時(shí)，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）。

42. 細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？

如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。

43. 無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？

當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。

44. 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

45.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì)影響它的性能。

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ScienCell胎牛血清保存血清最好方法是什么？

   我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi)，再放回冷凍。反復(fù)凍融會(huì)對(duì)血清的品質(zhì)造成不良影響。

② 如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？

   我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

③ 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？

   血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會(huì)聚集成團(tuán)，形成絮狀沉淀或外觀混濁；在運(yùn)輸過程中，由于時(shí)間較長，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉淀，但這些都不影響血清性能。

   若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。

④ 何謂熱滅活？

   一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。

⑤ 有必要作熱滅活嗎？

   實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜遒|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清，沉淀物的形成，會(huì)顯著增多，這些沉淀物在導(dǎo)致顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者認(rèn)為血清遭受污染，而把血清放進(jìn)37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

   因此我們建議您，若非必須，您可以不做熱滅活處理血清。這樣，不僅節(jié)省您寶貴時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)才推薦做熱滅活。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇。

⑥ 如何減少沉淀物的產(chǎn)生？

   我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作：

   ● 解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時(shí)，改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

   ● 解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

   ● 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

   ● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，則毋須做此步驟。

若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

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