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    腫瘤細胞耐藥的產(chǎn)生是一個復雜的過程，它的機制廣泛牽涉到藥物代謝學、病理學、生理學等多個學科，這就決定了腫瘤細胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥的機制是復雜的，因此體外建立化療藥物耐藥細胞株仍然是研究腫瘤細胞耐藥機制的重要方法。

    體外構建耐藥株細胞的基本原理是，細胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細胞本身藥物化學過程的改變，細胞膜上出現(xiàn)Pgp糖蛋白，使細胞逐漸對藥物耐受，隨著藥物濃度的遞增，其耐受程度逐漸加強。

    目前已知的體外建立耐藥細胞株主要有以下幾種方式：大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法、藥物濃度遞增與大劑量藥物沖擊相結合法、轉(zhuǎn)基因結合藥物篩選法等。藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法成為臨床建立腫瘤細胞化療耐藥模型的常用方法。

大劑量藥物沖擊法

    將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞（匯合度60%~80%）置于含有濃度的藥物濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液，PBS清洗兩遍，更換不含藥物培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)，待細胞恢復生長，培養(yǎng)一段時間后重復上述操作，將篩選出的細胞在一定濃度的藥物濃度培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)依這樣不斷改變作用時間，共經(jīng)過1h、2h、4h、6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h共10個作用時間段，約6-8個月的培養(yǎng)，最終使得細胞能夠在一定濃度的藥物的培養(yǎng)液中持續(xù)穩(wěn)定生長并傳代，然后脫藥培養(yǎng)1個月在檢測細胞的生物特性及耐藥指標。

    其優(yōu)點是與臨床上大劑量化療藥物沖擊的治療方式相接近，但是缺點在于大劑量藥物沖擊法的藥物濃度很高，細胞培養(yǎng)由于外環(huán)境驟變，細胞可能難以耐受，細胞狀態(tài)較難控制，且耐藥性能不穩(wěn)定。

藥物濃度遞增法

    取處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞（匯合度60%~80%），加入起始濃度為低濃度（建議為親本細胞株的IC50的1/10-1/5）的藥物作用24h，棄去培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養(yǎng)基，細胞恢復生長后，消化傳代復以低濃度作用細胞24h，待細胞增殖至正常形態(tài)后，重復上述藥物沖擊，每種濃度沖擊6-8次。待細胞在此濃度穩(wěn)定生長后，提高藥物濃度繼續(xù)培養(yǎng)，藥物依次遞增濃度加藥。藥物誘導歷時6-8個月，直到細胞能夠在濃度的藥物中穩(wěn)定生長。

    優(yōu)點在于誘導耐藥細胞的藥物劑量循序漸進，細胞培養(yǎng)的外環(huán)境逐漸改變，細胞較易耐受，狀態(tài)較好，缺點在于誘導耐藥過程耗時很長，且其化療藥物的作用方式與臨床上化療藥物大劑量短療程的化療原則存在一定的差異。

    無論使用哪種方法，都需要檢測親本細胞和耐藥細胞的IC50，通過IC50評估細胞的耐藥性。

    IC50(half maximal inhibitory concentration)，即半抑制濃度，指某一種物質(zhì)對某些生物程序抑制達到50%抑制效果時的濃度。通常用IC50來衡量藥物對細胞的毒性或者細胞對藥物的耐受能力,在藥物實驗中,常用IC50來評估實驗中使用的藥物濃度。

根據(jù)測定的親本細胞和耐藥細胞的IC50值，可以計算出耐藥指數(shù)（resistanceindex, RI），RI=耐藥細胞系的IC50/親代細胞系的IC50，若RI>5則認為耐藥細胞系的耐藥性符合耐藥株的要求。

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