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支原體污染一直是細(xì)胞培養(yǎng)的“頭號敵人"，但是支原體的存在卻十分普遍，它的“不請自來"總是讓我們措手不及。世界上有近60%的實驗室正在遭受支原體污染的困擾，今天就讓我們來好好認(rèn)識這個“刺頭"吧！

什么是支原體？

支原體結(jié)構(gòu)簡單，具有高度多形性、無細(xì)胞壁、增殖緩慢、可在人工培養(yǎng)基中存活并增殖的特點(diǎn)。除此之外，它的“個頭"很小，只有0.1-0.3um，可通過一般的濾菌器。支原體主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒。大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢，適宜生長溫度為35℃，最適pH值為7.8～8.0。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時，形成典型的“荷包蛋"狀菌落。

支原體是如何“欺負(fù)"細(xì)胞的？

我們知道一株被支原體污染的細(xì)胞是無法用來做實驗得出準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)的--一方面是因為支原體本身也是一種原核細(xì)胞生物，相當(dāng)于一種交叉污染；另一方面，細(xì)胞感染支原體后，由于支原體大量消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)和細(xì)胞代謝的基礎(chǔ)成分，包括核酸前體、氨基酸、維生素、脂質(zhì)、膽固醇等，導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢及各種代謝、功能紊亂甚至喪失；除此之外，支原體還會吸附在細(xì)胞表面，破壞細(xì)胞膜的完整性，更有少數(shù)類型支原體可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，如發(fā)酵支原體、生殖支原體和肺炎支原體。

如何“確診"細(xì)胞支原體污染？

支原體污染之所以讓廣大科研人員頭疼，是因為它在普通光學(xué)顯微鏡下難以被發(fā)現(xiàn)，并且細(xì)胞被污染早期不會表現(xiàn)出明顯的“癥狀"。

一般來說，如果培養(yǎng)過程中細(xì)胞增殖突然變慢，培養(yǎng)基中黑點(diǎn)、碎片明顯增多，培養(yǎng)基PH變化（變黃）周期變短，那么細(xì)胞很可能已經(jīng)感染了支原體。這時候，就需要使用各種檢測手段來確認(rèn)。目前常用的方法有：DNA染色法，支原體培養(yǎng)法，PCR法（包括凝膠電泳和熒光定量），化學(xué)發(fā)光法。前兩種方法結(jié)果可靠，但實驗周期長。PCR法原理是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計引物，通過檢測支原體DNA來檢測細(xì)胞中有無支原體的污染，得到的廣泛應(yīng)用。

細(xì)胞“確診"支原體污染后，怎么辦？

如果您的細(xì)胞不幸感染了支原體，比較好處理方式是立即丟棄該細(xì)胞，并對培養(yǎng)箱、超凈臺等設(shè)施及場所進(jìn)行消毒滅菌。因為支原體的傳播非常隱秘，相關(guān)研究表明其甚至能通過氣溶膠傳播。當(dāng)然，如果您的細(xì)胞非常珍貴或者不能再獲得，可以嘗試使用抑制支原體的藥物進(jìn)行處理，嘗試消除支原體污染。能抑制支原體的藥物有四環(huán)素；大環(huán)內(nèi)酯類藥物，如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等；喹諾酮類藥物，如氧氟沙星、司帕沙星等。

這個過程一般周期較長，因為使用藥物處理時需配合多次大比例連續(xù)傳代來提高成功率。堅持，就是勝利！

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