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蘇州千舍生物教你如何更好的培養(yǎng)細胞

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。

一、培養(yǎng)細胞不貼壁

可能原因：

●胰蛋白酶消化過度 ；

●支原體污染 ；

●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；               

●細胞老化 ；

●接種細胞起始濃度太低或太高 。

解決方法：

●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

●使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2 ；

●啟用新的保種細胞 ；

●調節(jié)zui佳接種細胞濃度。

二、懸浮細胞成簇

可能原因：

●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ；

●支原體污染；

●蛋白酶過度消化使得細胞裂解；

●DNA污染 。

解決方法：

●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體；

●用DNaseI處理細胞。

三、培養(yǎng)細胞生長緩慢

可能原因：

●由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

●培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

●培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；

●試劑保存不當；

●接種細胞起始濃度太低；

●細胞已老化；

●支原體污染 。

解決方法：

●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；

●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；

●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內用完；

●增加接種細胞起始濃度；

●換用新的保種細胞；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細胞生長不好

可能原因：

●細胞本身的狀態(tài)

細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；

細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；

細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；

胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未*分離而成團，細胞死亡；

細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染；

霉菌污染。

●培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；

選擇的培養(yǎng)基是否合適；

培養(yǎng)基配制是否準確無誤。

●培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應是否正常；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案

●注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；

●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；

●要用合適的血清或培養(yǎng)基，zui好經(jīng)過驗證；

●注意實驗室的環(huán)境。

五、培養(yǎng)細胞死亡

可能原因：

●培養(yǎng)箱內無CO2；

●培養(yǎng)箱內溫度波動太大；

●細胞凍存或復蘇過程中損傷；

●培養(yǎng)液滲透壓不正確；

●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法：

●檢測培養(yǎng)箱內CO2；

●檢查培養(yǎng)箱內溫度；

●取新的保存細胞種；

●檢測培養(yǎng)液滲透壓；

●換入新鮮培養(yǎng)液。

Hyclone胎牛血清SH30084.03

Hyclone胎牛血清SH30406.02

Hyclone胎牛血清SH30406.05

Hyclone胎牛血清SH30396.03

Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI

馬血清SH30074.03

烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS

BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A

BI 間充質胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108

Gemini特級胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特級胎牛血清F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122

雙抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

NCI-H1650 人肺支氣管癌細胞

RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤

SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細胞瘤細胞

SW982 人滑膜肉瘤細胞

T98G 人膠質母細胞瘤

U251MG(KO) 人類星形膠質細胞瘤細胞

U266 人骨髓瘤細胞

VCAP 人前列腺癌細胞

hTERT-HPNE 人胰腺導管細胞

ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞

H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化角質形成細胞

HCT116 人結腸癌細胞

HEK293 人胚腎細胞

HEPG2 人肝癌細胞

HGC27 人胃癌細胞(未分化)

HT-29 人結腸癌細胞

HUVEC 人臍靜脈內皮細胞

KYSE150人食道癌細胞

L02(HL7702)人正常肝細胞  

LOVO 人結腸癌細胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細胞

MCF7人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞

MDA-MB-468人乳腺癌細胞